1. 實驗室污染是導致假陽性結果的主要原因

 

  非洲豬瘟野毒感染時血液和組織中病毒載量非常高，經常檢測到Ct值15左右的樣本。樣本處理和提取的過程中需要進行離心操作，這些高濃度的樣本離心時容易造成氣溶膠污染。對于血液和組織樣本，檢測非洲豬瘟病毒應該盡可能減少離心操作，這類樣本病毒載量高、樣本較純凈，可以采用免提取檢測。

 

  實驗室如果長期檢測陽性樣本，擴增產物中高濃度的目的片段很容易擴散到空氣中并不斷累積導致氣溶膠污染。

 

  核酸自動提取儀可顯著提高實驗效率，然而，養殖企業實驗室大多使用中小型核酸自動提取儀，并且沒有適當的防污染措施，在樣本處理過程中可能出現交叉污染。相對于氣溶膠污染，樣本處理過程中交叉污染導致的假陽性概率較小。

 

  2. 熒光定量PCR試劑盒污染或者非特異性反應

 

  某些試劑盒沒有在GMP車間進行生產，或者GMP車間生產過程中車間潔凈度不夠或人員操作不規范，在試劑盒生產過程中可能出現陽性核酸片段或者質粒污染反應體系的情況。

 

  某些試劑盒生產工藝不過關，可能出現非特異性翹尾現象。

 

  試劑盒中引物、探針等原料品質不過關，質量控制不嚴格，也可能導致非特異性反應。

 

  3. 熒光定量PCR儀性能不佳導致翹尾

 

  筆者發現某些熒光定量PCR儀性能不佳，在反應后期出現非特異性翹尾峰。

 

  4. 電壓不穩導致的基線不穩定

 

  很多養殖企業將實驗室設置在豬場附近，使用電源大多是農用電，電壓不穩定，會導致擴增基線不穩定。另外，豬場附近的臨床實驗室停電風險相對較高。建議這些實驗室配備UPS緊急電源。

 

  5. 樣本或者氣泡干擾

 

  反應體系中存在氣泡或者某些樣本含有特殊成分可能干擾實驗，產生非特異性擴增曲線，這種擴增曲線通常不呈現典型的S型擴增曲線形態。