如何降低實驗室污染和假陽性？
發布時間：2021-08-29 瀏覽次數：4740次
實驗室質量管理的關鍵要素通常離不開人、機、料、法、環，保證實驗室質量，減少實驗室污染也離不開這幾個要素。
1. 加強人員培訓，養成良好的實驗習慣，建立有效的溝通和激勵制度
實驗室質量管理最核心的要素是人，必須培養良好的實驗操作和衛生習慣；
熒光定量PCR實驗室分試劑配制區、樣本處理區、核酸擴增區，嚴格分區管理；
不同區域的移液器用不同的標識區分，防止混用；
不同區域使用不同顏色的實驗服區分，防止混穿；
不同區域的耗材、垃圾桶、銳器盒、抹布、拖把不混用；
實驗完成后使用84消毒液擦拭地面、臺面及移液器等；
實驗完成后使用紫外消毒車0.5m左右照射臺面30min；
嚴禁在實驗室打開擴增后的熒光定量PCR管，嚴禁在實驗室區域對擴增后的熒光定量PCR產物進行高壓滅菌或者加熱處理。
2. 選擇性能良好的核酸提取儀和熒光定量PCR儀
大型的全自動化核酸提取儀設計時會引入分區設計、紫外防污染、層流防污染等措施，在選購核酸自動提取儀時應該考慮儀器的防污染性能。可以通過陰陽性樣本交叉擺放，同時提取最大檢測量的樣本，來評估核酸提取儀的防污染性能。
關于熒光定量PCR儀的選擇，某些儀器熱蓋設計存在嚴重缺陷，擴增結束后液體揮發嚴重，大量擴增產物泄漏，這種熒光定量PCR儀極易導致氣溶膠污染。
3．選擇帶UNG酶防污染體系和內參的熒光定量PCR試劑盒
科學的試劑盒會引入UNG酶防污染體系，同時通過產品設計，保證PCR擴增效率。在降低氣溶膠污染同時，保證檢測的敏感性。
在熒光定量PCR擴增原料中不加TTP，只加UTP，擴增產物是含有UTP的核酸片段。UNG酶可以水解含有UTP的核酸片段，在擴增程序前添加UNG酶反應程序，可水解反應體系中含UTP的擴增產物，然后使用95℃高溫滅活UNG酶，再運行熒光定量PCR反應程序，可以大幅度降低擴增產物氣溶膠污染。
某些試劑盒附帶的陽性對照濃度非常高（Ct值
使用帶內參的熒光定量PCR試劑盒監控每個反應是否正常；使用弱陽性的樣本（27
4. 熒光定量PCR應和普通PCR進行分區管理
某些檢測中心針對相同的傳染病檢測，可能既開展熒光定量PCR檢測，又開展普通PCR檢測。如果普通PCR的擴增片段覆蓋熒光定量PCR反應的擴增片段，則普通PCR的擴增產物極易污染熒光定量PCR檢測系統。
5. 規范設計，改善PCR實驗室環境
標準PCR實驗室通常分為四個區（熒光定量PCR實驗室無需產物分析區，分三個區），不同區域執行不同的實驗操作（表1），中間品通過雙扉傳遞窗單向傳遞。不同區域之間空氣互相不流通，使用空調凈化系統控制不同區域氣壓，形成壓差，控制空氣流向。每個區域設置緩沖間，緩沖間外部設置PCR實驗室專用走廊（圖1）。
表1 PCR實驗室不同區域劃分及功能特點
圖1 PCR實驗室平面布局示意圖
注：四個獨立工作區，從試劑配制區到產物分析區空氣壓力逐步降低；試劑配制區和樣本處理區是正壓室，外開門設計，保證外面的空氣不進入；核酸擴增區和產物分析區是負壓室，內開門設計，防止里面的空氣溢出。
目前很多集團公司中心實驗室裝修設計越來越規范，但是區域實驗室和臨床實驗室大多條件相對簡陋，很難達到標準實驗室要求。建議基層實驗室在布局時，盡可能分三個房間設置不同功能區，如果做不到空氣凈化和壓差控制，則每個房間應安裝排氣扇，及時通風。
專家點評
點評專家：王長年
非洲豬瘟背景下，豬場的生物安全風險(包括豬場人員流動、物品流動和豬只流動等)的監測評估、精準清除、引種(包括引入種豬和/或引入公豬精液等)都離不開實驗室的檢測，尤其是PCR實驗室的檢測。精準檢測也逐漸成為各養豬企業的核心競爭力之一。
PCR實驗室在檢測非洲豬瘟病毒核酸的過程中常見一些假陽性結果， 而這些錯誤的信息又會給豬場相關管理人員帶來極大的心理和工作壓力。本文作者就非洲豬瘟PCR檢測過程中經常出現的假陽性結果的主因(如樣本的采集、運輸、保存和處理、陽性對照、試劑盒生產廠家、與之配套的儀器設備等)進行分析，對如何減少和避免假陽性結果發生(如人員培訓、儀器配套、內參設置等)以及在實驗室建設方面進行科學、合理、規范化的設計(如分區設置、通風處理)等多方面內容進行介紹，非常適合廣大基層PCR實驗室作為參考。
編輯：河北方田 馮亞敏 審閱：仇華吉
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